ترجمه مقاله یک روش PCR زمان واقعی کمی برای طول تلومر مطلق
ترجمه مقاله یک روش PCR زمان واقعی کمی برای طول تلومر مطلق
| دسته بندی | مقالات ترجمه شده |
| فرمت فایل | docx |
| حجم فایل | 428 کیلو بایت |
| تعداد صفحات | 7 |
یک روش PCR زمان واقعی کمی برای طول تلومر مطلق
کوتاه شدن تلومر یک عامل خطر مهم برای سرطان و شتاب پیری است. در اینجا ما برای اندازه گیری طول تلومر مطلق توسعه یک روش ساده و تکرارپذیر را توصیف کردیم . بر اساس روش pcrکمی در زمان واقعی QRT-PCR کاتون، روش ما یک استاندارد oligomer استفاده میکند که می تواند برای تولید مقادیرطول تلومر مطلق و نسبت به تعاریف نسبی استفاده شود. ما ارتباط قوی بین این روش بهبود یافته و “استاندارد طلایی” از – آنالیز قطعه محدودیت ترمینال (TRF)اندازه گیری طول تلومر توسط هیبریداسیون جنوبی نشان دادیم. قابلیت تولید مقادیرطول تلومر مطلق باید یک مقایسه مستقیم تر از نتایج بین آزمایشها در داخل و بین آزمایشگاهها اجازه دهد. تلومرها از تکرار هگزومرطولانی تشکیل شده استTTAGGG که در برابر آسیب خود به خودی DNA محافظت میکند(1-4).یک عامل خطر مهم برای سرطان و پیری سریع (1-4) کوتاه شدن تلومر است. مامیخواهیم روش ساده و تکرارپذیر برای اندازه گیری طول تلومر مطلق توسعه دهیم . این روش بر اساس روش pcrکمی در زمان واقعی کاتون (QRT-PCR) می باشد که، در فرمت اصلی آن ،یک اندازه گیری نسبی از طول تلومر تولید میکند(5). DNA ژنومی با استفاده ازغشاء ژل سیلیکا- بر اساس DNeasy Tissue Kit (Qiagen، ملبورن، استرالیا) چنانچه توسط لو و همکاران توصیف شد. (7). همه بافرها توسط نیتروژن پاکسازی میشوند و با 50 میکرومولار فنیل-ترت –بوتیل-نیترو (سیگما، سیدنی، استرالیا) برای به حداقل رساندن آسیب اکسیداتیو به DNA،تکمیل میشوند که ممکن است بهره وری از PCR را تغییر دهد اگر سایتهای عبارت تولید شوند (6). لیز کننده درجه حرارت بالا اولیه و پروتئیناز هضم پروتئین k )10دقیقه در 56 درجه سانتی گراد) توسط دوره نهفتگی (6 ساعت) در دمای 37 درجه سانتیگراد برای به حداقل رساندن نسل سایت عبارت (7). شستشو ذیل از DNA خالص، 1 میلی DTT (دیتیوتریتول) اضافه شد وراه حل DNA در -80 ° C تا مورد نیاز ذخیره شد(7). DNA در سه نسخه با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر نانودراپ اندازه گیری شد (BioLabs، ملبورن، استرالیا). تقویت زمان واقعی کمی از دنباله تلومر انجام شده توسط Cawthon (5) با تغییرات زیر توصیف شد. منحنی استاندارد توسط محلول از مقادیر شناخته شده سنتز الیگونوکلئوتیدی 84 مر حاوی تنها تکرار TTAGGG ایجادشد(Geneworks، آدلاید، استرالیا).
مطالب زیر را حتما بخوانید:
قوانین ارسال دیدگاه در سایت